Siliang Huang , Ting Li, Tiantian Yang, Xueling Zheng , Di Yang , Gang Fu , Guoyue Hu , Aili Tao, Languang Wang , Tao Xu , and Yuying Li. First Report of Pulp Rot in the Externally Asymptomatic Pomegranate Fruit Caused by Talaromyces albobiverticillius in Henan Province, China.

Plant Disease, 2021,12,https://doi.org/10.1094/PDIS-09-21-1997-PDN

石榴作为一种受欢迎的落叶果树，在世界范围内由热带向温带生长，其中我国至少有12万公顷栽培面积。2020年8月，在中国河南省淅川县九重镇张河村(32°40´34˝N, 111°44´20˝E)，一个3年生软籽品种(突尼斯)的外部无症状的采前石榴果实发生严重腐烂。(12.6%)从11个新鲜取样的水果(调查的每个水果360个果肉)中评估果肉腐烂发生率。果实没有表现出外部症状，但是，与白色或粉色的正常果肉相比，果实在收获前部分果肉发生褐变。外部无症状水果的表面用75%乙醇消毒，并在洁净的工作台上风干。用消毒刀切开表面消毒的水果。用火焰灭菌镊子从水果中取出棕色果肉，放在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板上。在28℃培养5d后，从受影响的果肉中培养出具有相似表型特征的纯真菌培养物。两个随机选择的分离株Tp-2和Tp-8用于研究。分离物的菌落表面呈灰绿色，带有红葡萄酒红色的分泌物。红葡萄酒红色色素通常从菌落分泌到培养基中。分生孢子为单细胞，透明至灰色，多为橄榄球形，Tp-2尺寸为2.2~3.5(2.7)μm×1.6~2.0(1.8) μm(n = 50)，Tp-8为2.2~3.1(2.6) μm×1.6~2.2(1.8) μm(n = 50)。用引物ITS1/IT4和Bt2a/Bt2b分别扩增了分离株的rDNA内转录间隔区和β-微管蛋白基因序列。根据BLAST分析，rDNA-ITS序列的登录号为MW132153和MW132077，Tp-2和Tp-8的β-微管蛋白基因序列的登录号分别为MW507822和MW507823的序列被提交给GenBank，其与多个albobillius Talaromyces(TA)菌株的最大序列同一性大于99 %。在利用rDNA-ITS和β-微管蛋白基因序列构建的邻体进化树中，Tp-2和Tp-8都与多个TA菌株形成了一个分支，与其他Talaromyces spp明显分离。将Tp-2和Tp-8的分生孢子悬浮液(106个孢子mL-1)分别注射到五个石榴果实(突尼斯)中，所述石榴果实用无菌注射器从无病害的果园中取样。用无菌水接种的五种水果用作对照(CK)。接种的果实在25℃下培养10d，并从接种部位切掉。接种Tp-2/Tp-8的果实出现果肉腐烂症状，与自然感染的果肉相似。在接种试验期间，CK保持无症状。具有与接种物相同表型特征的真菌培养物不断从接种果实的棕色果肉中分离出来，根据科赫假设，证实Tp-2和Tp-8都是疾病的致病因子。在环境条件下长期(30-40d)储存期间，从受影响果园取样的水果在其果皮上出现褐色损伤，可从中分离出TA培养物。据报道，TA是导致意大利石榴采后果实腐烂的病原体(Mincuzzi等人，2017年)。这是国内首次报道TA引起外部无症状石榴果实腐烂。

补充图片S1。引起石榴果肉腐烂病的白腐菌的症状和形态特征。箭头显示外部无症状石榴果实内的果肉腐烂症状；从外部无症状石榴果实中取样的果肉，显示正常果肉(上排)和受影响果肉(下排)之间的表型差异；(C)在28℃的PDA平板(直径90毫米)上生长15天的Tp-8菌落，显示从菌落分泌到培养基中的红葡萄酒红色色素；分离的Tp-2接种石榴果实。红色箭头表示与对照(左侧)相比，隔离物引起的果肉腐烂症状(右侧)。白色箭头表示接种部位；(e)从受影响的果园取样并在25℃下储存40天的石榴果实的果皮出现褐色损伤，从该果皮中分离出albobiverticillius .培养物；(f)在扫描电子显微镜下观察到的分离株Tp-2的分生孢子和条纹(日立，SU8100)(比例尺= 10微米)。

补充图片S2。rDNA-ITS (a)和β-微管蛋白基因(b)序列的邻接进化树显示了引起石榴果肉腐烂的分离株(Tp-2和Tp-8)和其他Talaromyces种之间的遗传关系。从GenBank检索。括号中的数字代表GenBank中的登录号。这些值(来自500次复制)在分支节点上表示为引导支持的百分比。rDNA-ITS和β-微管蛋白基因序列的进化树分别来源于链格孢菌株ATCC 52170 (FJ545250)和黑曲霉菌株211 (KU750775)。比例尺分别代表rDNA-ITS (a)和β-微管蛋白基因(b)序列的系统发育树的每个核苷酸位置0.05和0.1个替换的遗传距离。